更新时间：
2025-01-02
来源：
j9游会真人游戏第一品牌医学
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多样本混检
淋巴细胞是参与机体免疫应答的重要细胞成分。根据表型及其生物学功能，可分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤NK细胞3个亚群。在人体内，T细胞介导细胞免疫以杀伤入侵的病原体；B细胞能通过产生抗体发挥特异性体液免疫功能；NK细胞发挥着重要的抗肿瘤、抗病毒感染的作用。《TBNK淋巴细胞检测在健康管理中的应用专家共识》中提到淋巴细胞亚群分析是目前流式细胞术临床应用范围最广泛的项目[1]，对许多疾病的诊断、治疗、预后都具有重要意义。
基于SFLO全光谱流式技术，我们根据不同激光器配置搭配了不同配色的CD3/CD16+CD56/CD45/CD4/CD19/CD8 TBNK检测方案，用于体外定量检测抗凝人外周血样本中淋巴细胞亚群比例。为了进一步提升多色流式细胞术的检测通量，我们开发了基于SFLO全光谱流式细胞仪的多荧光编码技术，利用5种不同荧光标记的CD45抗体，通过“5选2”的编码方式，达到一管同时检测10个样本的目的。CD45荧光抗体作为编码，没有引入其他不可控的因素，不会对细胞产生毒性或损伤，也不会影响其他细胞亚群的比例。该多编码方案能够在批量检测中显著节约试剂用量，原本检测10个样本需要10人份的TBNK抗体，而多编码后10个样本仅需要1人份的TBNK抗体，并且可以确保不同样本之间的抗体浓度一致，能减少因人工操作和机器状态带来的单个样本误差，极大地提高实验结果的可靠性和准确性。
本方案使用SFLO自带的CytoPysual软件进行手动圈门分析。
应用方案
仪器配置
SFLO3全光谱流式细胞仪（三激光）
激光器：405nm、488nm、635nm
Panel设计
“5选2”的编码方案
逻辑圈门
此panel从FSC/SSC淋巴细胞门开始分析（未展示），如图1所示，CD45是白细胞共同抗原，利用2种不同的CD45荧光抗体，将多编码染色管中的10个样本进行一一解码。
CD45+CD3+的细胞群为T细胞，CD45+CD3-的细胞群为Non T细胞群；进一步通过CD4和CD8标志物的表征，可以有效区分为CD4+ T细胞（Th细胞，CD45+CD3+CD4+CD8-）、CD8+ T细胞（CTL细胞，CD45+CD3+CD4-CD8+）。Non T细胞群，通过CD16/CD56和CD19进一步区分为NK细胞（CD45+CD3-CD16/CD56+CD19-）和B细胞（CD45+CD3-CD16/CD56-CD19+）。
将多样本编码的数据使用t-SNE高维分析，根据CD45染色，聚类区分为10个类群。同时，我们还比较了10个样本使用传统单个染色方法检测和多编码方法检测后的各个细胞亚群的比例，没有显著性差异，验证了多编码策略的可行性与可靠性。
图1. 人外周血淋巴细胞亚群TBNK多样本编码的解码策略及分型结果(仅以样本1的圈门图作为示例)
图2. 10个样本的t-SNE分布图
数据统计
本文设计了基于三激光j9游会真人游戏第一品牌医学SFLO全光谱流式细胞仪的多样本编码TBNK方案，可以在一管中采集10个不同的人外周血样本，实现对细胞群体的精准免疫分型，能够在批量检测中大幅度节约试剂用量，减少因人工操作和机器状态带来的误差，极大地提高实验结果的可靠性和准确性。
参考文献
[1] 程小艳, 武会娟. 流式细胞术最新进展及临床应用[J]. 中国免疫学杂志, 2019, 35(10): 1271-1276.
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