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      SFLO全光谱流式应用方案:人外周血T淋巴细胞精细分型(14色方案)
      • j9游会真人游戏第一品牌医学 更新时间:

        2025-01-02

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      人外周血T淋巴细胞

      临床上常用流式细胞术对外周血中的不同群体的T淋巴细胞进行鉴别和计数,比如CD3+ T细胞、CD8+ T细胞(CTL)、CD4+ T细胞(Th)、调节性T(Treg)细胞等。使用细胞表面标记物对T细胞亚群的定义不断发展。通过趋化因子受体7(CCR7)和CD45RA,可以将经典的T细胞定义为初始T细胞(Naïve,CCR7+CD45RA+)、中央记忆T细胞(CM,CCR7+CD45RA-)、效应记忆T细胞(EM,CCR7-CD45RA-)和终末分化效应记忆T细胞(TEMRA,CCR7-CD45RA+)。通过趋化因子受体(CXCR3和CCR6),可将Th细胞分为Th1细胞(CXCR3+CCR6-)、Th2细胞(CXCR3-CCR6-)以及Th17细胞(CXCR3-CCR6+)。这些细胞亚群之间相互协调,共同发挥免疫调节作用,维持机体稳态。

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      T淋巴细胞精细分型[1]


      本文开发了一个14色的人外周血样本表面标志物检测方案,利用j9游会真人游戏第一品牌医学SFLO全光谱流式细胞仪对人外周血样本进行了精细的T细胞分型鉴定,可以直观反映当前机体的免疫功能和稳态,辅助临床疾病诊断及预后。

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      应用方案


      仪器配置

      SFLO3全光谱流式细胞仪(三激光)

      激光器:405nm、488nm、635nm


      Panel设计

      人外周血T淋巴细胞精细分型检测方案标志物如下表所示:

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      逻辑圈门

      此panel从FCS/SSC图中圈出免疫细胞门,再利用死活染料圈出活细胞,接下来从SSC/CD45图中圈出淋巴细胞门(CD45+CD3+)。淋巴细胞门可以根据CD3、TCRγ/δ的表达区分出T细胞(T cells)、γ/δ T细胞和非T细胞(Non T)。T细胞进一步通过CD4和CD8标志物的表征,可以有效区分出CD4+ T细胞、CD8+ T细胞。CD4+ T细胞和CD8+ T细胞可进一步根据CD197、CD45RA的表达量不同区分为初始T细胞(Naïve)、中央记忆T细胞(CM)、效应记忆T细胞(EM)和重新表达CD45RA的终末分化效应记忆T细胞(TEMRA)。此外,通过CD25和CD127,可以鉴定出Treg细胞;通过趋化因子受体(CXCR3和CCR6),可将CD4+ T细胞分为Th1细胞(CXCR3+CCR6-)、Th2细胞(CXCR3-CCR6-)以及Th17细胞(CXCR3-CCR6+)。根据CD38和HLA-DR的表达,可以检测各T细胞亚群的活化状态。

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      图1. 人外周血T淋巴细胞精细分型方案圈门策略


      本文开发了基于三激光SFLO全光谱流式细胞仪的人外周血T细胞精细分型检测,在进行多色检测的同时无需考虑通道之间的干扰,实现对细胞群体的精准免疫分型,分析细胞亚群之间的功能联系,为疾病诊断和免疫功能评估提供有力支持。


      参考文献

      1. Maecker HT,McCoy JP,Nussenblatt R. Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol. 2012;12(3): 191-200.


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