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    SFLO全光谱流式检测应用方案: 人外周血B细胞亚群精细分型(15色)
    • j9游会真人游戏第一品牌医学 更新时间:

      2025-01-02

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    人外周血B细胞亚群

    在人体内,B细胞能通过产生抗体发挥特异性体液免疫功能,也可作为抗原提呈细胞摄取、加工并提呈抗原。未成熟的过渡性B细胞在骨髓中分化后进入外周血,进一步成熟为未接触抗原的初始B细胞。初始B细胞接受抗原刺激后可分化成为效应B细胞或记忆B细胞,而记忆B细胞能响应相同抗原的再次刺激,产生更迅速、更高效、更特异的体液免疫。边缘区B细胞约占人外周B细胞的20%,对于清除细菌感染至关重要。浆母细胞在人外周血中含量极低,在接种疫苗后或感染期间更容易检测到。

    本文使用SFLO全光谱流式细胞仪分析人外周血样本中的B细胞亚群,通过多个marker排除T细胞、单核细胞和NK细胞等干扰细胞,确保鉴别B细胞的准确性。对B细胞进行精细分型,鉴定出初始B细胞、记忆B细胞、过渡性B细胞、浆母细胞和边缘区B细胞等B细胞亚群,并进一步对记忆B细胞的各亚群进行分型。


    应用方案


    仪器配置

    SFLO3全光谱流式细胞仪(三激光)

    激光器:405nm、488nm、635nm


    Panel设计

    人外周血B细胞亚群基础分型(15色)方案标志物如下表所示,该方案包括了排除T细胞、单核细胞和NK细胞等干扰细胞的常用marker,和鉴定初始B细胞、记忆B细胞、过渡性B细胞、浆母细胞和边缘区B细胞等B细胞亚群的多种marker。


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    逻辑圈门

    此panel从SSC/CD45开始分析,如图1所示,圈门CD45+SSClow的淋巴细胞,根据CD3、CD14、CD16+56的表达情况依次排除T细胞、单核细胞和NK细胞,从中再鉴别出表达CD19的B细胞。几乎所有的活化B细胞都表达HLADR(HLADR+ B cells),此外,根据CD10的表达情况,可以在CD10+的B细胞中区分出过渡性B细胞(Transitional B cells,CD10+IgD+CD38+),剩下的大部分CD10- B细胞可以根据IgD和CD27的表达情况分为3群:初始B细胞(Naïve B cells,CD10-CD27-IgD+)、IgD阴性(CD10-IgD-)和双阳性细胞群(CD10-CD27+IgD+)。其中,双阳性细胞群可以通过CD38鉴别出边缘区B细胞(MZ B cells,CD10-CD27+IgD+CD38-),而IgD阴性细胞群可以通过CD20和CD27的表达情况鉴别出浆母细胞(Plasmablasts,CD10-IgD-CD20lowCD27high)和记忆B细胞(Memory B cells,CD10-IgD-CD20+CD27-/+)。根据CD21和CD27的表达情况,记忆B细胞可分为活化记忆B细胞(AM,CD21-CD27+)、组织样记忆B细胞(TLM,CD21-CD27-)、静止记忆B细胞(RM,CD21+CD27+)和中间记忆B细胞(IM,CD21+CD27-)。此外,记忆B细胞可表达不同的B细胞受体同种型,本方案可鉴别出IgA、IgG、IgM。



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    ▲ 图1.人外周血B细胞亚群精细分型(15色)方案圈门策略


    高维分析

    通过tSNE降维数据分析,识别出7个B细胞亚群,使用不同颜色进行标记区分,并在一张图中全部呈现,与手动圈门结果一致。

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    ▲ 图2.人外周血B细胞亚群精细分型(15色)降维t-SNE图


    FlowSOM聚类生成的热图全面展示了B细胞亚群中各个marker的表达情况,通过颜色的深浅直观地表示各个marker的强弱表达情况,颜色越亮,marker表达越强。

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    ▲ 图3. 人外周血B细胞亚群精细分型(15色)聚类热图

    本文使用SFLO全光谱流式细胞仪,在三激光配置下检测人外周血样本中的B细胞亚群,在进行多色检测的同时无需考虑通道之间的干扰,实现对细胞群体的精准免疫分型,分析细胞亚群之间的功能联系,为疾病诊断和免疫功能评估提供有力支持。

    j9游会真人游戏第一品牌医学SFLO全光谱流式细胞仪拥有丰富的荧光采集能力和强大的算法精确解析光谱,避免荧光重叠度高的光谱干扰,通过逻辑圈门的方式对数据进行分析,结果表明SFLO全光谱流式细胞仪可成功检测人外周血样本的B细胞亚群。


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